ShRNA沉默基因DNA甲基转移酶3b的表达对膀胱癌T24细胞增殖的影响

摘要

目的体外研究重组质粒 pshRNA-DNMT3b 对膀胱癌 T24细胞中 DNMT3bmRNA 和蛋白的沉默效应以及细胞增殖抑制的影响,初步探讨 DNMT3b 在膀胱肿瘤发生过程中的作用。方法实验分为空白对照组、HK 组及 pshRNA-DNMT3b 组（24、48、72 h）;常规培养 T24细胞,用脂质体 lipofectamine2000将重组质粒 pshRNA-DNMT3b 转染进入 T24细胞,后进行 RT-PCR、WesternBlot、MTF 检测,观察 pshRNA-DNMT3b 对 T24细胞中 DNMT3bmRNA、蛋白质水平变化以及细胞增殖的影响。结果重组质粒pshRNA-DNMT3b 成功的转染进入 T24细胞;RT-PCR 电泳结果用 Gel-pro analvzer 图像分析系统进行灰度分析,空白对照组、HK 组、pshRNA-DNMT3b 组（24、48、72 h）条带的 IOD 相对比值（DNMT3/β-actin）分别是（99.56±1.24）%、（99.12±1.35）%、（75.77±1.42）%、（44.69±1.05）%和（20.52±0.89）%;Western blot 图像分析结果各组的相对比值分别是（99.43±1.28）%、（98.90±1.31）%、（67.83±1.02）%、（43.43±1.05）%和（21.92±0.89）%;在 MTT 检测中空白对照组和 HK 组之间差异无统计学意义（P＞0.05）,pshRNA-DNMT3b 组仅在72 h 后和前2组之间差异有统计学意义（P＜0.01）,但抑制率仅增加0.45%左右。结论重组质粒 pshRNA-DNMT3b 能有效的降低膀胱癌 T24细胞中基因 DNMT3b mRNA 的转录及蛋白的表达,但在抑制细胞增殖上作用甚微。