SARS冠状病毒N蛋白的表达及二级结构预测分析

摘要

通过RT-PCR 获得SARS 冠状病毒N蛋白基因,分别克隆到原核表达载体pET21a, pET32a 和 pGEX-4T-1 中.将3种重组质粒pET21a-N, pET32a-N 和 pGEX-4T-1-N分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,细菌中分别表达出约46kD的重组N蛋白、约60 kD的6 xHis-N 融合蛋白和约70 kD的GST-N 融合蛋白,表达量分别达总蛋白的45%、40%和30%.进一步的分析表明:6 xHis-N 融合蛋白在大肠杆菌中为可溶性表达,该可溶性组分占细菌裂解液的70%左右,且能被6 xHis抗体所识别.用蛋白分析软件对N蛋白进行了序列分析和二级结构预测.SARS 冠状病毒N蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达, 有助于进一步结晶后进行X射线晶体衍射分析其结构与功能.