毛壳菌素通过作用于JAK2-STAT3信号通路抑制神经母细胞瘤的增殖及迁移

摘要

目的 探讨毛壳菌素影响神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖和迁移的机制.方法 应用DMSO作为对照,与毛壳菌素分别与SH-SY5Y细胞进行孵育,应用荧光定量PCR(RT-qPCR)和WB检测毛壳菌素的靶分子HIF-1α的mRNA相对表达水平以及蛋白表达水平.采用流式细胞术和CCK8实验检测细胞的增殖,利用Transwell试验检测细胞的迁移能力.采用流式细胞术和WB检测JAK2-STAT3信号通路的活化情况.结果 人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中HIF-1α的mRNA相对表达量为1.68±0.06,显著高于人正常胶质细胞(0.98±0.05,均P＜0.001),SH-SY5Y细胞系HIF-1α的WB检测的蛋白水平相对灰度值为1.81±0.04,显著高于人正常胶质细胞(0.97±0.06,均P＜0.001).毛壳菌素孵育后的SH-SY5Y细胞的Ki-67-high的占比为(35.89±7.23)％,显著低于DMSO对照组[(76.81±5.12)％,P＜0.01];Ki-67的平均荧光强度为573.7±80.25,显著低于DMSO对照组(1522±53.41,P＜0.001).CCK8检测细胞的增殖能力,毛壳菌素组在16h,24h和48h的OD450nm值分别为0.25±0.06,0.30 ±0.02,0.38±0.03,显著低于对照组(0.40±0.05,0.56±0.02,0.77±0.05,P＜0.01).迁移实验结果表明,DMSO对照组的迁移能力显著高于毛壳菌素组,细胞数分别为22816 ±4267.2和68172±9733.5,P＜0.001.WB分析JAK2和STAT3的磷酸化水平,毛壳菌素孵育细胞的p-JAK2和p-STAT3的蛋白相对表达水平显著低于DMSO对照组,差异具有统计学意义(P ＜0.001).流式细胞术分析SH-SY5Y细胞的p-JAK2和p-STAT3所占的比例及平均荧光强度,毛壳菌素组显著低于DMSO对照组,差异具有统计学意义(P＜0.01).WB和流式细胞术分别检测IL-6与毛壳菌素共同孵育后的JAK和STAT3的磷酸化水平,IL-6能够逆转毛壳菌素对JAK2和STAT3磷酸化的抑制作用.结论 毛壳菌素可能通过抑制HIF-1α,抑制JAK2-STAT3信号通路的活化,从而抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖和迁移.