新型二维高效液相色谱测定人血清伏立康唑浓度方法的建立与应用

摘要

目的 建立全自动二维高效色谱法(2 D-HPLC)测定血清中伏立康唑的浓度并应用于临床.方法 第一维色谱柱为ASTON SC2柱(4.6 mm×25 mm,5 μm),流动相为20 mmol/L磷酸铵∶乙腈∶甲醇=3∶1∶1(V∶V∶V,磷酸调pH=5.4),流速1.2 mL/min;第二维色谱柱为SHIMADZU C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为10 mmol/L醋酸铵(三乙胺调pH7.0)∶10mmol/L醋酸铵(三氟乙酸调pH3.0)∶甲醇∶乙腈=30∶10∶ 10∶ 50(V∶ V∶ V∶ V),流速1.0 mL/min;中间柱为ASTON SH柱(3 mm×10 mm,5μm),辅助流动相为纯水.样品由一维色谱柱萃取,经中间柱捕获并转移至第二维色谱柱分析,检测波长256 nm,柱温40℃,进样量200 μL.结果 伏立康唑在0.28～22.56 μg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 9,最低定量限为0.28 μg/mL,方法回收率为99.01％～104.62％,提取回收率为85.81％～89.82％,日内、日间精密度RSD均小于9％.结论 该方法操作简单、准确、灵敏,符合血清样品的测定要求,适用于伏立康唑临床血药浓度测定.