幽门螺杆菌双基因多表位重组原核表达工程菌的构建及其表达特性的研究

摘要

目的 构建含幽门螺杆菌尿素酶保守基因序列ureI和ureB的双基因(简称IB)多表位原核表达质粒以及原核表达工程菌,并研究其微生物学特性.方法 通过生物信息学方法从ureI 和 ureB 基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成所选择的表位基因序列并构建原核重组表达质粒pET28a(+)/IB.经限制性内切酶(EcoR I,Xho I)鉴定及DNA测序鉴定后,将重组质粒导入大肠杆菌 BL21(DE3).该工程菌经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白(rIB)的表达情况,用Western blot检测rIB的免疫反应性.结果 构建的双基因多表位基因序列与所设计的一致;工程菌经 IPTG 诱导后做 SDS-PAGE 电泳显示,在28 kD左右有一条明显蛋白条带,Western blot结果显示在28 kD左右出现特异反应条带.结论 成功构建含ureI 和ureB 双基因序列的原核表达质粒 pET28a(+)/IB 及工程菌,该工程菌表达的重组蛋白rIB能被抗幽门螺杆菌悉尼株(H.pylori SS1)的特异抗体所识别,表明该新重组蛋白与幽门螺杆菌有高度相关性.