呼吸道合胞病毒感染支气管上皮细胞介导IL-8致Th17/Treg失衡

摘要

目的:探讨呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染导致哮喘易感性增加的机制,观察人支气管上皮细胞感染RSV后IL-8的表达,以及IL-8对Th17/调节性T淋巴细胞(regulatory T cells,Treg)分化的调节作用.方法:将人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)分为对照组和RSV感染组,构建并验证RSV持续感染HBECs模型,real-time PCR检测对照组和RSV感染组中IL-8 mRNA的表达;ELISA检测感染细胞上清液中IL-8的浓度.提取健康人外周血淋巴细胞并将其分为空白对照组和IL-8作用组,参照ELISA检测到的浓度将IL-8作用于淋巴细胞24 h,采用流式细胞仪检测淋巴细胞中Th17和Treg亚群的分布情况.结果:本实验成功构建RSV持续感染HBECs模型,感染后的细胞仍能够继续分裂传代,并可检测到RSV持续存在的证据.免疫荧光显示细胞内有RSV致病蛋白的荧光表达;电镜下观察到感染细胞的线粒体水肿和内质网扩张,出现核周裂隙以及合胞现象,细胞核、胞浆内有病毒颗粒分布.Real-time PCR和ELISA分别检测到RSV感染组细胞内IL-8 mRNA表达和上清液中IL-8的分泌水平均高于对照组(均P＜0.05).进一步将IL-8作用于淋巴细胞,流式细胞学结果表明IL-8作用组淋巴细胞中Th17亚群比率增高(P＜0.05),但Treg亚群比率与对照组比较,差异无统计学意义(p＞0.05).结论:RSV感染气道上皮细胞后可通过过度分泌IL-8而引起Th17/Treg亚群分化异常.