兔外周血与骨髓源性内皮祖细胞培养鉴定及生物学特性的研究

摘要

目的:探索并建立兔内皮祖细胞(EPCs)的体外培养、鉴定方法.方法:采用密度梯度分离法分别从兔外周血和骨髓中分离出单个核细胞,接种于预包被明胶的培养瓶,并应用培养基(EBM-2)诱导培养,诱导分化为EPCs；在倒置显微镜下观察两种源性细胞生长过程；台盼蓝法测定细胞传代成活率；通过绘制生长曲线法、MTT法、DNA周期检测比较两种源性获得的EPCs增殖情况；采用免疫荧光染色观察EPCs相关抗原CD34、CD31、CD133及vWF因子的表达.结果:两种源性EPCs均于培养3～4d完全贴壁,呈克隆样生长,7 ～9d形成类似成熟血管内皮细胞形态,细胞数量逐渐增多,细胞成活率均为95％.两种源性获得的第2代细胞生长曲线近似“s”形、MTT法显示3～5d细胞增殖较明显,外周血源性EPCs G0-G1期和S+G2+M期所占比例分别为96.48％和3.52％,骨髓源性EPCsG0-G1期和S+G2+M期所占比例分别为97.11％和1.84％.第2代EPCs进行免疫荧光鉴定结果显示:两种源性内皮祖细胞均阳性表达CD34、CD133、vWF因子,CD31弱阳性表达.结论:两种源性的EPCs均可高效获得且在体外稳定培养.与传统的骨髓源性EPCs相比较,从外周血源获得的EPCs是一种可靠、简便的培养方法,为组织工程学提供理想的细胞来源.