人脑胶质细胞来源神经营养因子基因的克隆及测序

摘要

为研究人脑胶质细胞来源的神经营养因子（ｇｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ， ＧＤＮＦ） 在神经系统疾病中的作用，根据ＧＤＮＦ 的ｃＤＮＡ 序列设计并合成引物，以流产胎儿脑组织为来源，分别提取ＲＮＡ 和基因组ＤＮＡ 作模板，经ＲＴＰＣＲ 和ＰＣＲ 技术扩增人ＧＤＮＦ 基因片段，采用ＤＮＡ 重组技术将其克隆于ｐＧＥＭＴ Ｅａｓｙ 载体中并测序。结果：ＲＮＡ 和基因组ＤＮＡ 体外扩增得到的片段均是４１０ ｂｐ ，两者无差异。ＰＧＥＭＧＤＮＦ 经酶切鉴定正确，测序结果与Ｇｅｎｅｂａｎｋ 比较基本相同。由于ＲＮＡ 和基因组ＤＮＡ 扩增得到的片段大小相同，证实该基因片段内无内含子插入，该片段可用于真核及原核表达。