灵芝提取物对MPP+诱导的Neuro-2a细胞自噬的影响

摘要

目的 观察灵芝提取物(Ganoderma lucidum extract,GLE)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导的Neuro-2a细胞自噬的调节作用.方法 采用蛋白印迹检测自噬标志物LC3的转换(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)以及荧光显微镜检测LC3点状聚集物的形成.同时Western blotting法检测AMPK/mTOR/ULK1、PINK1/Parkin、NIX/LC3蛋白的表达水平.结果 激光共聚焦采集图像结果显示,Mpp+处理组细胞LC3-Ⅱ聚集于自噬体膜上,观察到呈点状聚集状态,而GLE干预组细胞点状聚集状态不明显.以LC3的点状聚集阳性细胞占总细胞的百分比评价自噬水平的高低.MPP+组呈绿色点状分布的LC3阳性细胞百分比明显升高,GLE组明显降低.Western blotting法检测结果显示GLE组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低.同时,经GLE处理后,可以改善MPP+损伤引起的AMPKo/mTOR/ULK1、PINK1/Parkin通路各蛋白异常表达.结论 GLE能抑制MPP+诱导的Neuro-2a细胞的自噬反应,调节细胞自噬相关蛋白AMPK/mTOR/ULK1以及PINK1/Parkin的异常表达,表明GLE可能通过调节细胞自噬而发挥神经保护作用.