克隆外显子探针反向斑点杂交检测DMD基因缺失

摘要

目的:制备检测DMD基因常见易缺失外显子的核苷酸探针,通过反向斑点杂交试验验证其特异性,为初步研制DMD基因诊断芯片作准备.方法:从健康人外周静脉血白细胞提取基因组DNA,应用经典18对引物对DMD基因常见易缺失外显子进行PCR扩增.将扩增产物与pGEM@-T Easy载体连接,转化E.coli JM109感受态细胞.克隆目的片段,并作测序鉴定.以此为探针进行反向斑点杂交试验.结果:序列分析表明,克隆片段代表DMD基因18个常见易缺失外显子;以这些片段为探针进行反向斑点杂交,其结果与PCR相符.结论:克隆的基因片段用作探针在反向斑点杂交试验中显示出较好的特异性,可用于DMD基因常见缺失的检测.