池蝶蚌HsCTL的分子特征及表达分析

摘要

C-型凝集素(C-type lectin,CTL)是存在动、植物及微生物中一类Ca2+依赖性的糖蛋白,能够识别和结合病原微生物表面的多糖物质,在机体免疫防御中起重要作用.为了解淡水育珠贝池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)CTL的分子特征及潜在作用,结合转录组高通量测序和末端快速扩增技术(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)从池蝶蚌中鉴定了一条与其他物种CTL同源的cDNA序列,命名为HsCTL.该序列全长为1716 bp,包括5′ 端非编码区92 bp,3′端非编码区898 bp,开放阅读框长726 bp,编码241个氨基酸,预测蛋白质相对分子量为28 ku.其氨基酸序列存在一个由23个氨基酸残基组成的信号肽和一个糖配体识别结构域(carbohydrate recognition domain,CRD),CRD结构域中仅包含1个QPD(Gln-Pro-Asp)基序.序列同源性及进化分析表明,HsCTL与斑节对虾(Penaeus monodon)CTL同源性最高,达36％,而与目前GenBank公开的其他贝类CTLs的同源性为9.7％ ～18.1％.构建的系统进化树显示,HsCTL与斑节对虾和中国明对虾(Fenneropenaeus chinensiss)的同系物聚为一支,与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)perlucin和九孔鲍(Haliotis diversicolor)CTL聚为相邻支.通过实时荧光定量RT-PCR检测发现,HsCTL的mRNA广泛分布于池蝶蚌各个组织,其中在血细胞表达量最高,外套膜和肝胰腺次之.且进一步发现,注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)后,HsCTL的mRNA表达量在血细胞和肝胰腺组织中显著增加.以上结果表明,HsCTL在池蝶蚌抵抗病原微生物的免疫防御反应中可能起到重要作用,结果为进一步研究HsCTL参与池蝶蚌先天免疫的分子机制打下基础.