声明
第 1章 前言
1.1 NF-κB基因的发现
1.2 NF-κB的成员和分子结构
1.3 IκB的成员和分子结构
1.4 NF-κB信号通路
1.5 IκB在水生动物中的研究
1.6 c-Rel在哺乳动物和鱼类中的研究
1.7 本研究目的和意义
第 2章 HsIκBα和 Hsc-Rel的 cDNA克隆和生物信息学分析
2.1 实验材料
2.2 实验方法
2.2.1 HsIκBα 和 Hsc-Rel的 cDNA 克隆
2.2.2 HsIκBα 和 Hsc-Rel的生物信息学分析
2.3实验结果
2.3.1组织总RNA和cDNA的检测
2.3.2 HsIκBα 和 Hsc-Rel的验证中间片段和 RACE-PCR 结果
2.3.3 HsIκBα 和 Hsc-Rel的 cDNA 序列结果
2.3.4 HsIκBα 和 Hsc-Rel蛋白结构预测
2.3.5 HsIκBα 和 Hsc-Rel的同源比对和系统进化树
2.4 讨论
第 3章 LPS 诱导下 HsIκBα 和 Hsc-Rel 的 mRNA 表达分析
3.1 实验材料
3.2实验方法
3.2.1 LPS 刺激处理
3.2.2 池蝶蚌总 RNA 的提取
3.2.3 RNA 的反转录
3.2.4 引物设计
3.2.5 荧光定量 PCR 检测
3.3 实验结果
3.3.1 LPS 诱导下 HsIκBα 的 mRNA 表达变化
3.3.2 LPS 诱导下 Hsc-Rel的 mRNA 表达变化
3.4讨论
第 4章 HsIκBα 和 Hsc-Rel-RHD 之间的相互作用
4.1 实验材料
4.2 实验方法
4.2.1 引物设计
4.2.2 重组质粒的构建
4.2.3 提取不去内毒素和去内毒素的重组质粒
4.2.4 HsIκBα-ORF-GST 蛋白和 Hsc-Rel-RHD-His 蛋白小量诱导表达
4.2.5 10%SDS-PAGE 检测蛋白小量诱导情况
4.2.6 HsIκBα-ORF-GST蛋白和 Hsc-Rel-RHD-His 蛋白大量诱导表达
4.2.7 HsIκBα-ORF-GST 蛋白和 Hsc-Rel-RHD-His 蛋白纯化和透析
4.2.8 GST pull-down
4.2.9 Western blot 验证 GST pull-down 实验结果
4.2.10 人胚胎肾细胞 HEK293T 的培养
4.2.11细胞转染
4.3 实验结果
4.3.1重组质粒的构建
4.3.2 HsIκBα-ORF-GST蛋白和 Hsc-Rel-RHD-His蛋白的诱导和纯化效果
4.3.3 GST 标签（pGEX-4T-1）蛋白和 His 标签（pET32a）蛋白的诱导和纯化效果
4.3.4 GST pull-down 结果
4.3.5 双分子荧光互补结果
4.4 讨论
第 5章 RNA干扰沉默 HsIκBα 对 Hsc-Rel 的 mRNA变化
5.1 实验材料
5.2 实验方法
5.2.1 RNA 干扰链的合成
5.2.2 HsIκBα 干扰链和阴性对照链的筛选
5.2.3 RNA 干扰正式实验
5.3 实验结果
5.3.1 HsIκBα 干扰链和阴性对照链的筛选
5.3.2 RNA 干扰正式实验
5.4 讨论
第 6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
致 谢
参考文献
附录 A 实验中所用引物信息
附录 B 实验仪器
附录 C 实验试剂和耗材
攻读学位期间的研究成果
南昌大学;
