人工合成的siRNA转染外周血活化T淋巴细胞方法学研究

摘要

观察人工合成siRNA与脂质体DMRIE-C Reagent的复合物对人外周血活化T淋巴细胞转染效果.人外周血标本中分离的外周血单个核细胞用抗原和IL-2刺激扩增培养,产生活化的T淋巴细胞,用不同配比浓度的荧光标记的siRNA-FAM与脂质体的复合物转染活化后的T淋巴细胞,分别采用转染一次和连续转染两次的方法,并在转染后4h,分别取样本,通过流式细胞测定技术,比较两种方法的转染效率,并筛选出最佳转染效率剂量配比.活化T细胞用转染一次和两次的方法后,平均转染阳性率分别为(12.5± 0.64)%和 (50.37±6.77 )%.采用连续两次转染的方法进行转染,转染效率要明显高于一次转染法.