辣椒SRAP-PCR反应体系优化与引物筛选

摘要

本研究以辣椒基因组DNA为模板,优化辣椒SRAP反应体系中的参数,建立了一套适用于辣椒的SRAP-PCR最佳反应体系.在25 μL反应体系中,模板DNA 50 ng、上下游引物各0.1nol/L、dNTPs 0.1mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U、Mg2+浓度为2.0 mmol/L.扩增程序为:94℃3 min;94℃30 s、35℃30 s、72℃1.5 min,5 cycles；94℃30 s、54℃ 30 s、72℃30 s,35 cycles；72℃10 min,用2％琼脂糖凝胶电泳和8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增结果.利用该优化体系筛选引物,筛选出条带清晰、重复性好的15对SRAP引物组合,验证了体系的实用性.