编码L-苏氨酸-O-3-磷酸盐脱羧酶基因的克隆和解析

摘要

[目的]为探索维生素B12生物合成的限速步骤奠定基础.[方法]提取费氏丙酸杆菌染色体DNA,利用Cassette和Cassette Primer的LA PCR技术克隆cobD的上游基因.将扩增的目的基因片段克隆至pGEM-T Easy Vector上,经PstⅠ酶切鉴定后对阳性克隆质粒进行测序,并应用Blast对所得碱基序列进行解析.[结果]经LA PCR扩增获得全长为1085 bp的目的基因.经Pst Ⅰ酶切鉴定.cobD基因成功克隆到pGEM-T Easy Vector上.测序结果表明,所得的基因为编码L-苏氨酸-O-3-磷酸盐脱羧酶的基因,与GenBank中cobD基因编码的氨基酸序列同源性为100%.[结论]在厌氧条件下,费氏丙酸杆菌具有与鼠伤寒沙门氏菌相似的合成途径.