小麦条锈菌AFLP体系的优化

摘要

[目的]优化小麦条锈菌AFLP体系.[方法]以小麦条锈菌大田混合菌系为材料,采用改良CTAB法提取DNA,探索酶切、PCR过程,优化小麦条锈菌AFLP体系,并从64对引物中筛选出稳定、高效的引物组合.[结果]改良CTAB法有较好的破壁效果,所提DNA纯度高,条带清楚,无污染,适合AFLP操作.酶切3.0、3.5 h的效果相同,扩出的片断在100～2 000 bp,可进行预扩.Taq DNA聚合酶为0.5 U时,电泳图中出现了较亮的条带,片断大小在100～2 000 bp.16对引物组合可以扩增出较稳定的条带.[结论]优化的小麦条锈菌AFLP体系为:25.0 μl酶切体系,37 ℃酶切3.0 h,10.0 μl连接体系在22 ℃条件下连接过夜,连接产物、预扩产物分别按1:10、1:30的比例用ddH2O稀释后用于预扩和选择性扩增.