简易快速高效制备T载体

摘要

[目的]制备成本廉价、使用方便、效率高的T载体.[方法]用Pst Ⅰ充分酶切纯化的质粒pUC19,再用T4DNA聚合酶消化15 min,电泳得到T载体,进行质量检测,并与商品化的T载体pMD18-T进行对比.[结果]自制的T载体自连检测只发现2个菌落与PCR扩增片段连接.经转化大肠杆菌JM109,pMD18-T的平均白斑率为99.4%,转化菌落为3.55万个/μg,自制T载体的平均白斑率为99.7%,转化菌落为3.38万个/μg,完全可以与商品出售的T载体媲美.[结论]该研究自制的T载体自连率低,假阳性率低,克隆效率高,可替代商品化的T载体用于TA连接,而且制备时间短,成本低廉,技术简单,值得推广.