真核表达载体pcDNA3.1(+)-vp28的构建及其在细胞中的表达

摘要

[目的]为研究对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白与虾细胞之间的作用机制奠定基础.[方法]采用PCR扩增方法构建含白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28的真核表达重组载体pcDNA3.1(+)-vp28,用磷酸钙共沉淀法将重组质粒转染到293T细胞中,采用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物.[结果]VP28的PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中呈现出1条634 bp左右的条带,与GenBank中vp28的序列完全一致.对pcDNA3.1(+)-vp28转染后的阳性单克隆菌落进行PCR鉴定、扩大培养和质粒提取,并对所得质粒进行HindⅢ和BamⅢ双酶切,获得了5 409和610 bp左右的2条带,与预期结果一致;所获扩增产物与vp28序列完全一致,说明重组质粒pcDNA3.1(+)-vp28被成功转染到293T细胞中;SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,pcDNA3.1(+)-vp28在293T细胞中的表达产物与预期结果相符.[结论]pcDNA3.1(+)-vp28在293T细胞中可成功表达VP28.