酵母双杂交系统筛选马铃薯StLURP1基因的互作蛋白

摘要

寄生霜霉菌响应迟发上调基因1(late up-regulated in response to Hyaloperonospora parasitica 1,LURP1)在植物抵御致病菌寄生霜霉菌(Hyaloperonospora parasitica,Hp)的反应和抗逆中起到关键作用.为了阐明马铃薯(Solanum tuberosum)LURP1基因的生物学功能并明确其在蛋白互作网络中的作用,本研究利用同源重组的定向克隆方式构建了其诱饵载体pGBKT7-StLURP1,并通过酵母(Saccharomyces cerevisiae)双杂交系统筛选马铃薯cDNA文库.结果 表明,双杂筛选的阳性率约为70％,最终获得88个阳性克隆,经测序鉴定出12种含完整开放阅读框的StLURP1互作蛋白,互作的真实性通过回转实验进行验证.对互作蛋白进行Blast比对和基因本体注释(Gene Ontology,GO)分析,结果显示,StLURP1与甘油磷酸二酯酶、富脯氨酸蛋白、多酚氧化酶、肌动蛋白解聚因子、重金属离子转运蛋白及DnaJ家族蛋白等多种蛋白相互作用,可能参与植物脂类代谢、生物与非生物胁迫响应、肌动蛋白解聚、重金属离子解毒及蛋白质折叠等生物过程.本研究为进一步研究StLURP1基因的生物学功能与作用提供了理论依据.