白背飞虱中肠内与SRBSDV P6蛋白互作的介体因子鉴定

摘要

南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)由白背飞虱(Sogatella furcifera)以持久增殖型方式进行传播.该病毒能够在白背飞虱体内大量增殖并使昆虫终生带毒,是因病毒在介体昆虫内能够诱导形成病毒复制工厂-病毒原质所致.SRBSDV病毒原质主要由病毒编码的P5、P6和P9-1 3个非结构蛋白及其介体因子参与形成.其中,P6蛋白分别和P5、P9-1蛋白及其介体因子相互作用,在病毒原质形成过程中发挥重要作用.为了揭示哪些介体因子参与调控SRBSDV在昆虫体内的增殖过程,本实验利用酵母双杂交技术,将SRBSDV P6基因构建到酵母诱饵表达载体pGBKT7上,并转化酵母感受态细胞Y2HGold,Western blot分析显示P6蛋白在酵母感受态细胞内成功表达,表达的P6蛋白对细胞无毒性和自激活活性.本研究以携带SRBSDV的白背飞虱中肠cDNA文库为筛选对象,初探介体昆虫内与SRBSDV P6蛋白相互作用的蛋白.在酵母Y2HGold细胞内经大量筛选和回转验证,最终获得5个可能与P6蛋白互作的介体因子.这些介体因子主要参与基因的转录、蛋白质翻译、蛋白翻译后修饰和蛋白质的合成过程.本实验为深入解析介体因子调控病毒的复制过程和白背飞虱高效传播病毒的分子机制提供了理论基础.