用一种改进的粘粒文库筛选方法克隆人α-乳清白蛋白基因

摘要

本文所介绍的粘粒文库筛选方法,是以PCR技术为基础[1],并针对粘粒克隆扩增的不均一性而设计的.从扩增一次的粘粒文库中(载体pWE15)取1～2×106个粘粒克隆,将其分成96份,经PCR筛选,从中找出阳性管;将阳性管中所有克隆按每板1～1.5×103个克隆的方式铺板培养(约200个平板),再筛选鉴定含有阳性克隆的菌落平板,最后将阳性菌落平板进行菌落原位杂交,成功地筛选到2个人的α-乳清白蛋白基因阳性克隆(45～55 kb); 特异引物直接对粘粒阳性克隆进行部分序列测定及鉴定分析,结果进一步证明该阳性克隆含有不完全的人α-乳清白蛋白基因,并绘出了该阳性克隆约10 kb的片段物理图谱.