苜蓿根瘤菌聚羟丁酸解聚酶基因(phbD)突变体的构建及其特性

摘要

根据苜蓿根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti)Rm1021基因组中与Ralstonia eutropha phaz基因同源部分序列设计1对引物,从S.meliloti基因组中用PCR扩增出835 bp phbD基因片段并克隆到载体pGEM(R)-TEasy上;通过在phbD基因内插入ΩSmSp和基因置换构建了phbD突变体.该突变体可积累比野生型菌株多1.0～2.6倍的聚羟丁酶(PHB).在YMA和TY平板上形成非粘液型菌落,而在以乙酰乙酸或3-羟丁酸为唯一碳源的M9基本培养基(M9-AA,M9-HB)上形成粘液型菌落.碱性磷酸酶测定结果表明,通过接合引入phbD突变体菌株中的exoF-phoA融合基因在YMB培养基中低量表达,而在M9-AA和M9-HB中高量表达.