人IGF-1基因重组杆状病毒表达载体的构建及在sf9细胞中的表达

摘要

以pcDNA3.1/IGF-1为模板,采用PCR方法对IGF-1基因进行扩增,EcoRⅠ和SalⅠ酶切回收含IGF-1基因的DNA片段,与pFastHTA连接,获得重组载体pFast/IGF-1;将其转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH10Bac感受态细胞,经卡那霉素、四环素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-IGF-1,PCR鉴定得到单一IGF-1条带.将该病毒载体转染sf9细胞,进行病毒重组,Western-blot检测IGF-1表达,并用MTT法检测促内皮细胞生长活性.结果成功获得了重组病毒,Western-blot检测出现1条约13.0 kD的带,MTT法检测IGF-1促细胞生长率为24.4%.