检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体的单抗竞争ELISA方法的建立

摘要

用纯化的产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenic Pasteurella multocida,T+Pm)毒素基因片段的原核表达产物免疫小鼠(Mus muslucus)制备单抗,并利用表达蛋白和辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗AH12建立了竞争ELISA方法检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体.经实验确定抗原包被浓度223 ng/mL,待检血清最佳稀释度1:2,酶标单抗AH12工作浓度1:3 200,血清抑制率大于50%为阳性.稳定性试验表明,批间和批内变异系数均小于10%.应用竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时检测50份已知血清和82份未知血清,已知血清检测结果显示两者阳性符合率为90%,阴性符合率为100%;未知血清检测结果显示竞争ELISA的检出率为40.2%,细胞毒性中和试验检出率为36.6%,两者符合率达91.5%.表明所建立的单抗竞争ELISA方法具有敏感、特异、稳定和简便等特点,在实验室诊断的标准化、猪群萎缩性鼻炎疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有应用价值.