基因芯片检测拉米夫定治疗慢性乙型肝炎后引起的HBV YMDD变异

摘要

目的建立乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断方法.方法设计特异性寡核苷酸探针数组,特别处理芯片载体,用点样法制备乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片.选择30例服用拉米夫定后,HBV DNA转阴(＜500copies/ml),68周后又反跳≥500copies/ml的病人进行基因芯片杂交检测分析.同时用PCR直接测序法对病人血清标本进行双盲HBV DNA聚合酶活性区域测序对照.结果 30例服药后HBV DNA反跳病人中,基因芯片测得HBV YMDD变异21例,其中YVDD变异11例,YIDD变异10例.HBV DNA PCR直接序列测定结果为有核苷酸A741变为G,使氨基酸由蛋氨酸552变为缬氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YVDD),6例核苷酸A669变为C,氨基酸由亮氨酸528变为蛋氨酸;核苷酸G743变为T,使氨基酸由蛋氨酸552变为异亮氨酸.(氨基酸基序由YMDD变为YIDD).其中有3例伴有核苷酸T781变为C,使氨基酸由亮氨酸565变为脯氨酸.标本阳性变异序号与基因芯片检测结果完全一致.结论乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异,与PCR直接测序法比较,准确率达100%.