樱花基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

摘要

为确保樱花RAPD扩增结果的稳定性和重复性,对Mg2+、dNTP、引物、模板DNA浓度、Taq酶用量、退火温度,以及PCR循环次数等影响樱花RAPD结果的重要因素进行了初步探索.试验表明,樱花RAPD扩增最适反应体系为20μl反应液中:1×PCR buffer,2.5 mmol/L MgCl2,0.15 mmol/L dNTP,1 U Taq酶,0.2 μmol/L 10bp随机引物,20～30 ng模板DNA.最佳扩增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性30 s,38℃退火30 s,72℃延伸2 min,循环40次,最后72℃延伸10 min,12℃保存.