快速PCR介导的NeuroD-3′UTR的定点突变研究

摘要

糖尿病是一种由遗传和环境因素共同引起的代谢紊乱综合征.与肝细胞核因子有关的幼年发病的成人型糖尿病(MODY)属于特殊类型的糖尿病,分为6型,其中Ⅵ 型MODY为bHLH家族转录因子NeuroD突变引起的疾病.在体内NeuroD能够与A类bHLH的转录因子E47结合,进而形成二聚体.这种二聚体能够与胰岛素基因的E盒高亲和力结合,从而激活胰岛素相关基因的转录表达;因此,NeuroD对胰腺β细胞的生理功能有很重要的影响.本试验利用PGMT-NeuroD-3′UTR质粒,通过一次PCR方法使NeuroD-3′UTR上的多个位点发生定点突变,并筛选出突变的目的片段;随后将突变的片断连接到萤光素酶报告载体PGL3-CONTROL上,构建了PGL3-3′NeuroD突变载体.该结果可为探讨NeuroD基因在胰腺β细胞发育中的生理功能,及进一步治疗糖尿病的研究提供了试验基础.