印度梨形孢的荧光定量PCR检测及其在水稻根系的定殖测定

摘要

印度梨形孢(Piriformospora indica)是一种促进作物生长、增强植株抗逆性的多功能根系内生真菌。传统染色镜检和PCR方法检测存在干扰误差大、灵敏度不高、难以定量等问题。基于P.indica转录延伸因子EF1α基因建立P.indica的实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,并通过对水稻苗根系P.indica的定殖检测,比较与染色法、常规PCR法检测结果的差异。结果表明,利用EF1α基因序列引物扩增获得84 bp特异性产物,以特异性产物构建重组质粒pCE2-Pi作为qPCR扩增的标准品模板,建立的标准曲线线性关系良好且灵敏度高,qPCR检测下限为2.03×10^(2)copies/μL,较常规PCR敏感度提高1000倍,实现P.indica的快速、准确、定量检测。对水稻苗根系P.indica的定殖检测进一步表明,染色法检测受取样部位影响大,仅在定殖7 d的部分根系中检出,而PCR法灵敏度较低,也只在定殖7 d的根系中扩增出产物。采用qPCR方法在3~13 d的定殖周期根系中都检测到了P.indica的有效定殖,定殖7 d扩增产物最高,为1.51×10^(4)copies/μL。