检测植烟土壤黑胫病菌定殖量的锁核苷酸增敏实时荧光定量PCR检测方法

摘要

一种检测植烟土壤黑胫病菌定殖量的锁核苷酸增敏实时荧光定量PCR检测方法，该方法以烟草黑胫病菌中的5.8S？ribosomal？RNA及其相邻的ITS？区域片段设计引物；正向引物为：5’-TGAACGCATATTGCACTTCC-3’；反向引物：？？5’-GACAAACCAGTCGCCAATTT-3’；LNA修饰位点以下划线表示。通过普通引物PCR扩增、克隆获得阳性重组质粒，然后以已知浓度的含有目的基因的质粒作为模板同时以LNA修饰的引物进行荧光定量PCR反应，作出标准曲线图以及标准曲线，通过样品检测结果与标准曲线对比，确定待测样品中的黑胫病菌的数量。该检测方法适用于烟草种植土壤中黑胫病菌定殖的检测，高效、简单易行、价格低廉，检测只需在4~5小时内即可完成，具有较高的检测灵敏度，能为我国黑胫病的防控起到一定的作用。