CCK-8对LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞p38 MAPK、STAT3表达及TNF-α活性的影响

摘要

目的 本实验在细胞水平,观察了八肽胆囊收缩素(CCK-8)及其受体非特异性抑制剂丙谷胺(proglumide,Pro)对LPS引起的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)分泌TNF-α的影响,并进一步观察了p38 MAPK和STAT3的表达.方法 分离正常大鼠肺泡巨噬细胞,调节细胞浓度为1×106/ml,分组如下:①对照组;②LPS组:LPS终浓度5 μg/ml;③CCK-8+LPS组:CCK-8终浓度10-10 mol/L、10-8 mol/L或10-6 mol/L,LPS 剂量同前;④CCK-8组:10-10 、10-8 和10-6 mol/L;⑤Pro+LPS+CCK-8组:2 μg/ml丙谷胺,10 min后加入5 μg/ml LPS及10-8 mol/L CCK-8.收集刺激4 h的细胞培养上清,应用L929细胞株进行TNF-α活性的生物学检测.刺激30 min后,采用免疫细胞化学法观察p38 MAPK和STAT3表达的变化.结果 与对照组(6.76±1.39) pg/ml相比,LPS组TNF-α活性显著增加(1091.14±67.35) pg/ml(P＜0.01).10-10 mol/L、10-8 mol/L和10-6 mol/L的CCK-8均显著抑制LPS诱导的AM释放TNF-α,且呈剂量依赖性,依次为(970.67±111.53) pg/ml、(583.48±62.03) pg/ml和(484.24±72.01) pg/ml(P均＜0.01).CCK-8本身不影响TNF-α产生.CCK受体非特异性拮抗剂丙谷胺可逆转CCK-8的抑制作用.免疫细胞化学结果显示CCK-8可增强LPS引起的AM中磷酸化的p38 MAPK和STAT3的表达.结论 p38 MAPK为多种信号转导途径的交汇点.CCK-8可能通过激活p38 MAPK途径及激活STAT3来调节AM的功能.