结肠癌相关抗原的纯化与分析

摘要

目的 从培养的人结肠腺癌细胞系LS-180细胞中纯化结肠癌相关抗原,并对其基本特性进行分析,探讨其在结肠癌组织中的表达.方法 以人结肠腺癌细胞LS-180免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,通过有限稀释法得到能稳定分泌抗LS-180细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株.再以5×106/mL腹腔注射BALB/c小鼠,收集腹水.裂解LS-180细胞,通过抗结肠癌相关抗原mAb SCAb8与免疫沉淀柱偶联进行免疫沉淀纯化结肠癌相关抗原SC8.浓缩后经SDS-PAGE、Western blot和ELISA法对纯化抗原进行鉴定.并用免疫组化的方法检测该抗原在结肠癌组织及正常组织和其他癌组织中的表达.结果 纯化所获结肠癌相关抗原SC8,其相对分子质量(Mr)约为61 000,由30 000和31 000两种亚基组成,免疫组化实验表明,SC8在结肠癌组织中有较高的表达,与癌旁正常组织及其他癌组织相比存在显著的统计学差异(P＜0.05).结论 利用单克隆抗体SCAb8进行免疫沉淀,从人结肠腺癌细胞LS-180中获得纯化的肿瘤相关抗原SC8,该抗原有可能在临床上为结肠癌的诊断和治疗提供一定的参考价值.