miR-211抑制剂靶向上调Notch22介导β-晶体蛋白B2表达参与年龄相关性白内障进程研究

摘要

目的 探讨微小核苷酸-211(microRNA-211,miR-211)与 β-晶体蛋白B2(β-crystalin B2)参与的年龄相关性白内障的作用及其机制.方法 通过CCK-8以及流式细胞术检测不同浓度双氧水或不同表达miR-211后HLEC-3细胞活性的变化.生物信息学方法预测miR-211与Notch2潜在的结合位点.Westren blot以及逆转录定量PCR(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检不同表达miR-211后HLEC-3细胞中Nocth2蛋白以及Mrna的变化.采用荧光素酶报告方法确认miR-211与Notch2的靶向性.Western blot检测单独miR-211或共表达miR-211+Notch2或低表达Notch2后 β-crystallin B2蛋白的变化.结果 过氧化氢(hydrogen peroxide,H 2 O2)能够明显降低HLCE-3细胞的活性(t=3.67,P<0.05).下调miR-211可以明显抑制H 2 O2诱导的晶状体上皮细胞(HLEC-B3)凋亡(t=4.07,P<0.05);上调miR-211则可以显著地加重氧化因子表达(t=4.21,P<0.05).同时,荧光素酶(luciferase)和Western blot研究实验表明,上调miR-211靶向抑制Notch2的表达(t值分别为4.02和3.90,P值均<0.05).与此相一致的是,下调miR-211则可以恢复Notch2的蛋白表达水平(t=4.04,P<0.05).除了Notch2之外,miR-211 inhibitor也可以增加 β-crystallin B2的表达,而沉默Notch2表达后,则可以明显抑制由miR-211 inhibitor引起的 β-crystallin B2表达升高(t值分别为4.20,4.19和4.15,P值均<0.05).结论 miR-211靶向调控Notch2表达使β-crystallin B2的表达增加,表明miR-211可能是治疗年龄相关白内障的潜在药物靶点.