重组毕赤酵母中Textilinin-1基因拷贝数的荧光定量PCR检测

摘要

目的 利用荧光定量PCR检测重组毕赤酵母外源纤溶酶抑制剂Textilinin-1基因的拷贝数.方法 采用双标准曲线法,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因为内源参照基因,分别利用含有GAPDH和Textilinin-1基因的质粒,进行荧光定量PCR反应,建立标准曲线.对重组毕赤酵母基因组进行荧光定量PCR反应,通过标准曲线计算出外源Textilinin-1基因在毕赤酵母基因组中的拷贝数.结果 GAPDH和Textilinin-1基因的扩增效率分别为95.04％和96.36％.两条标准曲线的决定系数均为0.999,且均具有良好的重复性.共检测10个单菌落,均得到Textilinin-1基因拷贝数为2.结论 建立的方法能够鉴定重组毕赤酵母中Textilinin-1 基因的拷贝数.