幽门螺杆菌外膜蛋白18的克隆表达及纯化研究

摘要

目的 克隆表达幽门螺杆菌(HP)外膜蛋白,为HP的疫苗开发及诊断试剂盒的研究奠定基础.方法 用PCR方法从HP临床分离株9806的染色体DNA中扩增出OMP18基因片段,将目的基因插入表达载体pQE30中,重组载体pQE30-OMP18经DNA测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌E.coli.M15,IPTG诱导表达.采用镍离子亲和层析纯化蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定其表达.结果 PCR扩增出长度为537 bp的 OMP18基因,片段测序分析其与GenBank公布的核苷酸序列相似性达99%;SDS-PAGE显示,重组工程菌经IPTG诱导表达了分子量为20.0 kDa的目的蛋白,占总蛋白的20%,经纯化后,目的蛋白纯度达85%以上;Western blot结果表明,该蛋白可与兔抗HP的多克隆抗血清发生特异的抗原抗体结合反应.结论 成功构建了OMP18表达载体pQE30-OMP18,并在大肠杆菌中获得高效表达,为HP疫苗有效抗原筛选及诊断试剂的开发奠定基础.