幽门螺杆菌外膜蛋白cagL基因的克隆、表达及其对IL-8 mRNA表达的影响

摘要

目的：克隆表达幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）NCTC11637菌株cagL基因,并探讨其对IL-8mRNA表达的影响。方法：设计cagL引物,应用PCR扩增目的基因片段,TA克隆后测序分析,用信息学软件分析其物理化学特性,并构建表达载体cagL-PET28 a（＋）转化E.coliBL-21（DE3）,IPTG诱导表达,镍亲和层析纯化,SDS-PAGE及蛋白质印迹鉴定表达蛋白。纯化蛋白与细胞GES-1共培养,提取细胞总RNA,RT-PCR检测细胞IL-8mRNA表达。结果：测序分析表明cagL编码成熟肽的碱基序列为654 bp,编码217个氨基酸,与基因库公布的其他H.pylori菌株的基因序列同源性为96%~98%,氨基酸同源性为97%~99%,软件预测显示有多个明显的具有抗原活性的结构域;表达蛋白的相对分子质量约为32 000,蛋白质印迹检测融合蛋白具有良好的抗原活性;重组蛋白作用于GES-1细胞后,可诱导细胞因子IL-8在mRNA水平上的表达。结论：CagL蛋白可刺激GES-1细胞IL-8 mRNA的表达。