幽门螺杆菌18000u外膜蛋白编码基因的克隆及表达

摘要

目的:构建含幽门螺杆菌(Hp)18000u外膜蛋白编码基因的重组载体并在E.coli BL21中表达。为Hp的疫苗开发、快速诊断试剂盒的研究奠定基础。 方法:用PCR从Hp染色体中,扩增18000u外膜蛋白编码基因片段。将目的基因与pET32a(+)同时经Bam H I,Hind Ⅲ双酶切、纯化、连接,转化含有目的基因的重组载体。以含目的基因片段的重组载体转化大肠杆菌BL21(DE30)并表达。表达产物经纯化后,用ELISA法检测其抗原性。 结果:经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hp 18000 u的外膜蛋白编码基因,与Tomb等报道相比较,有2％编码基因发生变异,1.7％氨基酸残基改变。经SDS-PAGE分析发现,融合基因表达的蛋白为38000 u,其中pET32a(+)表达的蛋白约为20000 u,可溶性表达产物占全菌总蛋白的21.3％。重组蛋白经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95％以上。ELISA法检测显示,该重组蛋白可被Hp阳性患者的血清所识别,具有良好的抗原性。 结论:成功地克隆并表达Hp 18000 u的外膜蛋白编码基因,为Hp蛋白质疫苗的研制和快速诊断试剂盒的研究奠定了基础。