幽门螺杆菌外膜蛋白hopX基因克隆表达及生物信息学分析

摘要

目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp) hopX 外膜蛋白编码基因的重组质粒,并进行生物信息学分析,探索筛选 Hp 疫苗的新途径.方法:应用 PCR 技术从 Hp 基因组扩增 hopX 外膜蛋白编码基因片段,TA 克隆后测序分析,用信息学软件分析其物理化学特性,并构建表达载体 hopX-pQE30 转化E.coli M15, IPTG 诱导表达, SDS-PAGE及Western blot 鉴定表达蛋白.结果:测序分析表明 hopX 基因全长为1 284 bp,与GeneBank 公布的其他Hp菌株的基因序列同源性为 96%～97%,氨基酸同源性为97%～99%,软件预测显示有多个明显的具有抗原活性的结构域.SDS-PAGE 检测表明,47 kD处有一新生的蛋白带,Western blot 检测重组蛋白具有良好的抗原活性.结论:首次获得HpNCTC11637菌株hopX基因,其表达产物为外膜蛋白生物学功能和疫苗的研究奠定了基础.