猪圆环病毒2型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR诊断方法的建立

摘要

根据GenBank中猪圆环病毒2型ORF2基因序列设计特异性引物,PCR扩增获得猪圆环病毒2型ORF2基因片段,并克隆到pMD-18T载体上作为阳性标准品.通过对SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR反应条件的优化,建立了猪圆环病毒2型的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR诊断方法.扩增产物的溶解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对PRV、PPV、E.coli、CSFV、PRRSV均无阳性信号,可重复性好,测灵敏度可达4.0×101拷贝/μL.结果表明,建立的猪圆环病毒2型SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR具有特异、灵敏、快速、重复性好,适合于猪圆环病毒2型临床样品的检测.