ORF2基因

摘要： 【目的】了解目前广东省猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)分离株的基因型和进化特征,为广东省PCV2防控及疫苗株的筛选提供参考依据。【方法】运用PCR方法将4份鉴定为PCV2阳性样品进行PCV2全基因组序列扩增、测序及遗传进化分析;利用MegAlign软件对4株PCV2广东分离株ORF2氨基酸序列与国内外参考毒株进行关键位点氨基酸变异分析;应用DNAStar中Protean软件的Jameson-Wolf方法对4株PCV2广东分离株ORF2基因编码的Cap蛋白与4株疫苗株进行抗原指数预测分析。【结果】测序结果表明,4株PCV2广东分离株序列长度均为1767 bp。遗传进化树结果表明,4株分离株均属于PCV2d基因型,且核苷酸相似性在97.7%~99.1%之间,与国内外54株参考毒株相似性在91.7%~99.8%之间,其中与PhuTho/G40312/2018株(Viet Nam,登录号:LC602996)、QZ1410株(江苏,登录号:MG732832)、GXBB1501211株(广西,登录号:MH756609)亲缘关系最为接近。关键氨基酸位点变异分析表明,在Cap蛋白上有8个氨基酸特异性突变位点,分别是Y3C、F8Y、T56S、R116K、V123I、K164E、R169G及T216A。抗原指数分析发现,广东省分离株的Cap蛋白抗原指数与4株疫苗株相比差异较大,主要集中在第7-12、47-53、80-90、160-170和205-213位氨基酸这5个区域。【结论】从广东省部分地区分离的4株PCV2均为2d亚型,其Cap蛋白氨基酸序列存在多个突变位点,抗原指数与疫苗株差异较大,提示广东省PCV2的流行趋势逐渐以2d亚型为主。

摘要： 为了掌握广西猫杯状病毒(FCV)的流行情况及其变异规律。本研究于2018年3月至2019年9月采集疑似FCV鼻拭子59份,其中阳性检出率49.2%(29/59)。将阳性病料接种CRFK细胞,成功分离获得一株FCV毒株,命名为NN01-19。为深入了解其遗传进化规律和分子特征,本研究通过RT-PCR方法扩增获得该毒株的全基因组序列,并对其ORF2基因进行了遗传进化和序列分析。结果表明,NN01-19毒株基因组全长7709 bp,其中ORF2基因全长2010 bp。遗传进化分析发现该毒株与广西早期分离株GX01-13同属基因I群,但核苷酸和氨基酸同源性仅为77.9%和86.5%。其中,超变区(E区)抗原线性表位新增T448A、T450G、G451Q和T454S四个突变位点。重要的是,该区域还发生了V430T的突变,符合VS-FCV致病性氨基酸突变特点。本研究为深入了解FCV的流行特点及其变异规律提供了参考依据,同时也为今后防控FCV提供了重要的理论基础。

摘要： 【目的】利用原核表达系统表达1型鹅星状病毒(Goose astrovirus 1,GAstV-1)结构蛋白ORF2,并制备其多克隆抗体。【方法】根据GAstV-1 TZ03株基因序列,对ORF2基因序列进行大肠杆菌密码子偏爱性优化和合成,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-ORF2,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达重组蛋白,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白;将鉴定正确的重组蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,以间接免疫荧光试验鉴定多克隆抗体的特异性。【结果】酶切和测序结果显示,成功获得重组质粒pET-ORF2;SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白分子质量约为70 ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果表明,该蛋白能与抗His标签鼠单克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA检测制备的兔抗ORF2蛋白多克隆抗体效价达1∶128000;间接免疫荧光试验结果显示,制备的多克隆抗体能与GAstV-1发生特异性反应。【结论】原核表达的GAstV-1 ORF2重组蛋白具有良好的免疫原性,制备的兔源多克隆抗体具有较高的效价和特异性,为研制GAstV-1相关诊断试剂奠定了基础。

摘要： 为了解上海郊区猪场戊型肝炎病毒(HEV)的感染情况,从3个猪场随机采集180份新鲜粪便样本,用逆转录巢式聚合酶链反应对HEV ORF2部分基因片段进行扩增、克隆及测序。结果表明:HEV RNA的PCR检测总阳性率为15.6%,个别猪场HEV RNA检出率达30%,且存在基因3型和4型同时检出的情况。经NCBI数据库BLAST比对分析,23份样本为基因4型,5份样本为基因3型。遗传进化分析显示,基因3型和4型毒株与来源于上海地区的参考毒株遗传关系最近,核苷酸同源性分别为97.9%和96.3%。研究表明,上海郊区某些猪场HEV感染率仍较高,且存在基因3型与4型共感染的现象,应注意加强防控。

摘要： 为初步了解当前河北省猪圆环病毒2型流行情况,于2021年10月至2022年6月从河北邢台市及周边地区79个猪场共收集205份病猪组织样品,采用实时荧光定量PCR方法检测病料样品中PCV2核酸阳性率;同时采用PCR法扩增部分PCV2阳性样品ORF2基因序列,分析毒株基因型和基因变异情况。结果发现,送检样品中,PCV2检测场阳性率和样品阳性率分别为51.90%(41/79)和32.68%(67/205),其中不同地区场阳性率和样品阳性率分别为22.22%~63.64%和20.83%~43.33%;此外,不同类型猪场和不同临床症状猪群来源样品PCV2检出率存在较大差异。10份PCV2阳性样品ORF2基因序列成功扩增(均为705 nt),其中6份样品ORF2基因核苷酸序列与已知PCV2d毒株同源性最高,4份样品与PCV2b毒株同源性最高,提示PCV2b和PCV2d可能为河北省主要流行的基因型。

摘要： 为掌握我国新型鹅星状病毒(goose astroviruses,GoAstV)的遗传变异方向,对2019年从我国不同地区发病鹅病料中分离到的10株新型GoAstV,采用PT-PCR技术扩增其ORF2基因,然后进行测序和遗传进化分析.结果显示:分离毒株ORF2基因全长2115 bp,编码705个氨基酸;毒株间核苷酸和氨基酸同源性分别为96.2％～99.9％和96.3％～99.9％;分离毒株与参考毒株Goose/SDPY/1116/17亲缘关系最近,处于同一分支.将分离毒株ORF2氨基酸序列与参考毒株进行比较后发现,该基因编码的衣壳蛋白氨基酸序列有多处位点存在差异,表明当前我国GoAstV流行毒株已发生变异.本研究为后续新型GoAstV的分子生物学特性研究及其疫苗研制提供了参考.

摘要： 为了解广东地区规模化种鸡场禽戊型肝炎病毒(avian hepatitis E virus,aHEV)的流行情况,在2020年5月至2021年1月期间,从广东地区7个规模化种鸡场(A～G)的祖代和父母代鸡群(25周龄以上)随机采集血清样本325份、新鲜死淘鸡的组织样本(肝脏和脾脏)134份.利用商品化的aHEV抗体试剂盒检测血清样本,采用SYBR GreenI荧光定量PCR检测组织样本中的aHEV.结果显示:血清样本中aHEV抗体的个体阳性率为0.0～36.0％,组织样本中aHEV核酸个体阳性率为0.0～25.0％;基于aHEV的部分ORF2基因的遗传进化分析表明,B、C、D场的aHEV属于基因3型aHEV,A场的aHEV在单独的进化分支上.结果表明,广东地区有部分种鸡场已有aHEV感染,需要加强对aHEV的监测.

摘要： 为了解猪圆环病毒2型(PCV2)在河北地区流行特点及遗传演化规律,本研究参照GenBank登录的部分PCV2全基因序列,经序列比对后选取保守区域设计一对PCV2检测引物,利用PCR方法对2015年～2019年间在河北秦皇岛及周边地区收集的379份来源于不同病猪的肝、脾、肺、肾、肠、脑、淋巴结及血清等样品开展PCV2的分子流行病学调查,结果显示共检出203份PCV2阳性样品,阳性率为53.6％.根据阳性病料的采集时间、地点等特征选择47份阳性病料样品扩增其ORF2基因并测序,分析该基因及其氨基酸序列与GenBank登录的参考株和已知的疫苗株相应基因与氨基酸序列的同源性,并构建ORF2基因的遗传进化树.结果显示,2015年～2019年间河北秦皇岛及周边地区PCV2优势流行株为PCV2b和PCV 2d亚型,但也有少量PCV 2e的流行,分离株ORF2基因与疫苗株的同源性较低,为87.3％～96.2％,可能影响疫苗保护效力,提示应密切监测PCV2的流行情况,并及时筛选更换疫苗株.本研究了解了不同基因型PCV2在河北秦皇岛及周边地区的流行及遗传演化情况,并发现少量PCV2e毒株在秦皇岛地区的流行可能具有时间和地域特异性,以上结果充实了河北地区PCV2的流行病学调查数据的同时也为PCV2的防控提供了参考依据.

摘要： 为了解陕西省屠宰生猪猪圆环病毒2型(PCV2)的感染及其遗传变异情况,通过PCR方法,对2018—2019年采自陕西省咸阳和杨凌地区生猪屠宰企业的300份血样进行PCV2病原学检测,并扩增部分阳性样品的开放阅读框2(ORF2)基因,同时进行序列比对和遗传变异分析。试验结果显示,38份血样PCV2病原学检测为阳性,阳性率12.67%;选取的20份阳性血样,扩增ORF2基因并比对分析,结果11个属于PCV2b亚型(55%),9个属于PCV2d亚型(45%),说明PCV2b亚型和PCV2d亚型是陕西省屠宰生猪中PCV2的主要流行毒株。本研究结果有利于掌握陕西省屠宰生猪中PCV2毒株流行情况,从而为PCV2感染的针对性防治提供依据。

摘要： 以新型鹅星状病毒(goose astrovirus, GAstV)ORF2基因为序列设计1对特异性引物,利用PCR方法进行扩增,将其克隆到原核表达载体pET-30a中,转化DH5α感受态细胞,经酶切鉴定及测序后,获得重组质粒pET30a-ORF2。随后转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western blot检测重组蛋白。将鉴定正确的重组蛋白纯化后免疫家兔,制备抗鹅星状病毒衣壳蛋白的多克隆抗体。结果:成功获得ORF2基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,大小约84 kDa,且均能与His单抗和鹅阳性血清特异反应。制备的多克隆抗体,Western blot检测能与重组蛋白发生特异性反应,间接免疫荧光试验(IFA)检测也能与新型鹅星状病毒发生特异性反应。本试验结果表明,原核表达的新型鹅星状病毒结构蛋白ORF2及制备的多抗均具有良好的免疫原性和反应原性,为新型鹅星状病毒检测方法的建立及ORF2基因功能研究奠定了基础。

摘要： 为了鉴定本研究构建的猪2型圆环病毒pIRES-ORF2核酸疫苗的免疫效果,试验采用间接ELISA方法和T淋巴细胞亚类计数法进行效果评估.结果表明:免疫1w后小鼠产生特异性PCV2抗体,并逐渐提高,在首免后第5w达峰值,显著高于对照组(P＜0.05),该疫苗可以诱导小鼠产生抗PCV2特异性的体液免疫.同时,疫苗免疫组小鼠脾T淋巴细胞CD3+CD8+亚类显著高于灭活苗免疫组和plRES对照组(P＜0.05),疫苗免疫组T淋巴细胞CD3+CD4+亚类显著高于pIRES对照组(P＜0.05).

摘要： 为了鉴定本研究构建的猪2型圆环病毒pIRES-ORF2核酸疫苗的免疫效果,试验采用间接ELISA方法和T淋巴细胞亚类计数法进行效果评估.结果表明:免疫1w后小鼠产生特异性PCV2抗体,并逐渐提高,在首免后第5w达峰值,显著高于对照组(P＜0.05),该疫苗可以诱导小鼠产生抗PCV2特异性的体液免疫.同时,疫苗免疫组小鼠脾T淋巴细胞CD3+CD8+亚类显著高于灭活苗免疫组和plRES对照组(P＜0.05),疫苗免疫组T淋巴细胞CD3+CD4+亚类显著高于pIRES对照组(P＜0.05).

摘要： 为了鉴定本研究构建的猪2型圆环病毒pIRES-ORF2核酸疫苗的免疫效果,试验采用间接ELISA方法和T淋巴细胞亚类计数法进行效果评估.结果表明:免疫1w后小鼠产生特异性PCV2抗体,并逐渐提高,在首免后第5w达峰值,显著高于对照组(P＜0.05),该疫苗可以诱导小鼠产生抗PCV2特异性的体液免疫.同时,疫苗免疫组小鼠脾T淋巴细胞CD3+CD8+亚类显著高于灭活苗免疫组和plRES对照组(P＜0.05),疫苗免疫组T淋巴细胞CD3+CD4+亚类显著高于pIRES对照组(P＜0.05).

摘要： 为了鉴定本研究构建的猪2型圆环病毒pIRES-ORF2核酸疫苗的免疫效果,试验采用间接ELISA方法和T淋巴细胞亚类计数法进行效果评估.结果表明:免疫1w后小鼠产生特异性PCV2抗体,并逐渐提高,在首免后第5w达峰值,显著高于对照组(P＜0.05),该疫苗可以诱导小鼠产生抗PCV2特异性的体液免疫.同时,疫苗免疫组小鼠脾T淋巴细胞CD3+CD8+亚类显著高于灭活苗免疫组和plRES对照组(P＜0.05),疫苗免疫组T淋巴细胞CD3+CD4+亚类显著高于pIRES对照组(P＜0.05).

摘要： 猪圆环病毒2型感染主要引起断奶仔猪多系统消耗综合征,给养猪业造成了巨大的经济损失.本研究采集福建地区不同猪场临床疑似猪圆环病毒病6头仔猪肺、淋巴结组织,病毒核酸提取后用PCV2ORF2特异引物进行PCR扩增、凝胶电泳,确诊5头仔猪PCR阳性,阳性率83％,回收、纯化阳性条带后送生物公司测序.序列比对分析发现5份样品ORF2的变异程度很小,主要是1-7个碱基点突变,有1处2个碱基连续突变,没有插入或缺失突变,同源性为91.6％-99.8％.基因遗传进化树分析显示5份样品集中在同一细分支,但与Genbak收录的福建5株及国内其它省7株相比,分布较散,结果显示国内毒株之间与地理位置存在不均一性.国内毒株与国外PCV1、PCV2毒株ORF2序列相比则分别处于不同分支上,在基因进化树上,基因分支与地理位置存在相关性.

摘要： 猪圆环病毒2型感染主要引起断奶仔猪多系统消耗综合征,给养猪业造成了巨大的经济损失.本研究采集福建地区不同猪场临床疑似猪圆环病毒病6头仔猪肺、淋巴结组织,病毒核酸提取后用PCV2ORF2特异引物进行PCR扩增、凝胶电泳,确诊5头仔猪PCR阳性,阳性率83％,回收、纯化阳性条带后送生物公司测序.序列比对分析发现5份样品ORF2的变异程度很小,主要是1-7个碱基点突变,有1处2个碱基连续突变,没有插入或缺失突变,同源性为91.6％-99.8％.基因遗传进化树分析显示5份样品集中在同一细分支,但与Genbak收录的福建5株及国内其它省7株相比,分布较散,结果显示国内毒株之间与地理位置存在不均一性.国内毒株与国外PCV1、PCV2毒株ORF2序列相比则分别处于不同分支上,在基因进化树上,基因分支与地理位置存在相关性.

摘要： 猪圆环病毒2型感染主要引起断奶仔猪多系统消耗综合征,给养猪业造成了巨大的经济损失.本研究采集福建地区不同猪场临床疑似猪圆环病毒病6头仔猪肺、淋巴结组织,病毒核酸提取后用PCV2ORF2特异引物进行PCR扩增、凝胶电泳,确诊5头仔猪PCR阳性,阳性率83％,回收、纯化阳性条带后送生物公司测序.序列比对分析发现5份样品ORF2的变异程度很小,主要是1-7个碱基点突变,有1处2个碱基连续突变,没有插入或缺失突变,同源性为91.6％-99.8％.基因遗传进化树分析显示5份样品集中在同一细分支,但与Genbak收录的福建5株及国内其它省7株相比,分布较散,结果显示国内毒株之间与地理位置存在不均一性.国内毒株与国外PCV1、PCV2毒株ORF2序列相比则分别处于不同分支上,在基因进化树上,基因分支与地理位置存在相关性.

摘要： 猪圆环病毒2型感染主要引起断奶仔猪多系统消耗综合征,给养猪业造成了巨大的经济损失.本研究采集福建地区不同猪场临床疑似猪圆环病毒病6头仔猪肺、淋巴结组织,病毒核酸提取后用PCV2ORF2特异引物进行PCR扩增、凝胶电泳,确诊5头仔猪PCR阳性,阳性率83％,回收、纯化阳性条带后送生物公司测序.序列比对分析发现5份样品ORF2的变异程度很小,主要是1-7个碱基点突变,有1处2个碱基连续突变,没有插入或缺失突变,同源性为91.6％-99.8％.基因遗传进化树分析显示5份样品集中在同一细分支,但与Genbak收录的福建5株及国内其它省7株相比,分布较散,结果显示国内毒株之间与地理位置存在不均一性.国内毒株与国外PCV1、PCV2毒株ORF2序列相比则分别处于不同分支上,在基因进化树上,基因分支与地理位置存在相关性.

摘要： 猪圆环病毒2型(PCV2)是一种可导致断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪呼吸疾病综合征(PRDC)、猪皮肤和肾病综合征(PDNS)等多种疾的DNA病毒.目前国内外研制的多种形式的PCV2疫苗为此病的防控发挥了显著的作用,但是效果仍不理想.而国际上正在研制的ORF2核酸或蛋白疫苗越来越成为PCV2的理想候选疫苗.鞭毛蛋白可刺激机体产生前炎性因子,在连接天然免疫应答和获得性免疫应答中起重要作用.本研究通过将编码鞭毛蛋白的基因和ORF2基因融合克降进pMT/Bip/V5-HisA表达载体,转染S2细胞,用CuSO4诱导目的蛋白的表达,并通过间接免疫荧光(IFA)和Western blotting进行鉴定,筛选到的单克隆S2细胞有明显的荧光反应,表达的蛋白能与小鼠V5单抗和兔PCV2抗血清结合,从而建立了能稳定表达此融合蛋白的果蝇表达系统,为PCV2新型疫苗的研究奠定了基础.

摘要： 猪圆环病毒2型(PCV2)是一种可导致断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪呼吸疾病综合征(PRDC)、猪皮肤和肾病综合征(PDNS)等多种疾的DNA病毒.目前国内外研制的多种形式的PCV2疫苗为此病的防控发挥了显著的作用,但是效果仍不理想.而国际上正在研制的ORF2核酸或蛋白疫苗越来越成为PCV2的理想候选疫苗.鞭毛蛋白可刺激机体产生前炎性因子,在连接天然免疫应答和获得性免疫应答中起重要作用.本研究通过将编码鞭毛蛋白的基因和ORF2基因融合克降进pMT/Bip/V5-HisA表达载体,转染S2细胞,用CuSO4诱导目的蛋白的表达,并通过间接免疫荧光(IFA)和Western blotting进行鉴定,筛选到的单克隆S2细胞有明显的荧光反应,表达的蛋白能与小鼠V5单抗和兔PCV2抗血清结合,从而建立了能稳定表达此融合蛋白的果蝇表达系统,为PCV2新型疫苗的研究奠定了基础.

摘要： 本发明提供一种共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF3及ORF5双基因核酸疫苗的制备方法，该方法是通过RT-PCR方法分别扩增PRRSV ORF3及ORF5的全基因序列，并将2个基因插入哺乳动物真核表达载体pIRES的2个多克隆位点，获得重组质粒S-W-PIRES。将重组质粒转染COS1细胞，通过RT-PCR方法检测到PRRSV ORF3及ORF5基因的转录，通过免疫组化检测到目的蛋白的瞬间表达。该核酸疫苗可在动物体内持续不断的产生GP3蛋白及GP5蛋白，使机体不断产生针对两者的抗体及细胞免疫反应，对猪体提供持久的免疫保护力，在PRRS的防控中具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明属于分子诊断技术领域，具体涉及一种用于检测2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因对应mRNA的引物组及试剂盒。本试剂盒逆转录与荧光定量PCR单管密闭完成，以随机引物和多聚T引物作为逆转录的引物，将提取的mRNA逆转为cDNA，只需一次逆转即可适用于ORF1ab基因、N基因对应mRNA的检测。检测过程中以2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因对应mRNA作为检测靶标，以RT‑qPCR作为检测工具对2019新型冠状病毒进行定性检测。本试剂盒使用的分子信标探针可以很好的克服RT‑qPCR常用的Taqman探针Tm值偏低，热稳定性弱，杂交特异性低等缺点，分子信标探针具有较高的灵敏度，本发明所述试剂盒最低可检测10个拷贝的靶标序列。

摘要： 本申请提供C8orf84基因，其全长mRNA序列如SEQ ID NO:1所示，其中编码区如SEQ ID NO:2所示，还提供C8orf84蛋白，其包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，还提供特异性扩增C8orf84基因mRNA的引物对，其中正向引物如SEQ ID NO:4所示，反向引物如SEQ ID NO:5所示。本申请还提供该C8orf84基因和该C8orf84蛋白用于制备治疗膀胱癌的药物组合物的用途，以及该引物对用于制备膀胱癌检测试剂盒的用途。本申请亦提供包含该C8orf84基因或该C8orf84蛋白的药物组合物，以及包含该引物对的膀胱癌检测试剂盒。本发明在膀胱癌的治疗和检测上具有应用前景。

摘要： 本发明公开了C12orf70和C17orf107基因在胰腺癌检测产品中的应用。并证实了C12orf70和C17orf107基因在胰腺癌生物学样品中下调。本发明还提供了用于检测C12orf70和C17orf107基因的表达水平的试剂盒和生物试剂，以及其在胰腺癌高危人群筛选、诊断、治疗、监测及预后中的应用。利用C12orf70和C17orf107基因在胰腺癌高危人群中进行检测，能够快速有效的做到胰腺癌的早期诊断，而且为预测诊断胰腺癌的发生发展甚至是为今后在生物学水平治疗胰腺癌提供了治疗靶点和重要依据，可应用于胰腺癌的诊断、治疗、监测及预后。

摘要： 本发明涉及一种PCV2密码子优化ORF1和ORF2串联基因的重组病毒，属于生物制药领域。人工合成密码子优化的PCV2ORF1和ORF2基因，命名为YHsfORF1-2。将YHsfORF1-2克隆入杆状病毒表达载体pFastBacHTA中，即获得重组质粒pFBHYHsfORF1-2。而后将重组质粒转染Sf9细胞，获得重组杆状病毒vFBHYHsfORF1-2。在重组杆状病毒vFBHYHsfORF1-2中，ORF1和ORF2蛋白能够成功的高效表达，并能形成病毒样颗粒。本发明还涉及该重组病毒在疫苗方面的应用，动物试验证明由该重组病毒所制的灭活疫苗，可刺激机体产生高效的免疫应答，对PCV2有较好的免疫保护作用。

摘要： 本发明提供一种共表达猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV) ORF5及ORF6双基因核酸疫苗的制备方法，该方法是通过RT－PCR方法分别扩增PRRSV ORF5及ORF6的全基因序列，并将2个基因插入哺乳动物真核表达载体pIRES的2个多克隆位点，获得重组质粒pIRES－ORF5及ORF6，将重组质粒转染CHO细胞，建立稳定表达的细胞系，通过RT－PCR方法检测到PRRSV ORF5及ORF6基因的转录，通过SDS－PAGE和Western blot检测到GP5及M蛋白的表达和免疫活性。该核酸疫苗可在动物体内持续不断的产生GP5蛋白及M蛋白，使机体不断产生针对两者的抗体，对猪体提供持久的免疫保护力，在PRRS的防控中具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明提供一种共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF3及ORF5双基因核酸疫苗的制备方法，该方法是通过RT－PCR方法分别扩增PRRSV ORF3及ORF5的全基因序列，并将2个基因插入哺乳动物真核表达载体pIRES的2个多克隆位点，获得重组质粒S－W－PIRES。将重组质粒转染COS1细胞，通过RT－PCR方法检测到PRRSV ORF3及ORF5基因的转录，通过免疫组化检测到目的蛋白的瞬间表达。该核酸疫苗可在动物体内持续不断的产生GP3蛋白及GP5蛋白，使机体不断产生针对两者的抗体及细胞免疫反应，对猪体提供持久的免疫保护力，在PRRS的防控中具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种内含新型冠状病毒ORF1ab基因、E基因和N基因装甲RNA标准物质。该标准物质是利用MS2噬菌体装甲RNA技术，将新型冠状病毒ORF1ab基因、E基因和N基因用MS2噬菌体的衣壳蛋白包装而成，本发明制备的标准物质具有稳定、无生物传染性、可真实模拟病毒粒子结构、耐RNase等特性，适用于新冠病毒以ORF1ab基因、E基因和N基因为靶标的核酸检测方法的质量控制，以及检测试剂和实验室能力的评价。

摘要： 本发明属于分子诊断技术领域，具体涉及一种用于检测2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因对应mRNA的引物组及试剂盒。本试剂盒逆转录与荧光定量PCR单管密闭完成，以随机引物和多聚T引物作为逆转录的引物，将提取的mRNA逆转为cDNA，只需一次逆转即可适用于ORF1ab基因、N基因对应mRNA的检测。检测过程中以2019新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因对应mRNA作为检测靶标，以RT‑qPCR作为检测工具对2019新型冠状病毒进行定性检测。本试剂盒使用的分子信标探针可以很好的克服RT‑qPCR常用的Taqman探针Tm值偏低，热稳定性弱，杂交特异性低等缺点，分子信标探针具有较高的灵敏度，本发明所述试剂盒最低可检测10个拷贝的靶标序列。

摘要： 本发明属于生物技术领域，涉及一种结直肠癌辅助免疫治疗靶基因C16orf54检测试剂盒及应用。本发明研究证实结直肠癌中C16orf54表达显著下降。C16orf54表达水平与免疫微环境指标StromalScore，ImmuneScore和ESTIMATEScore均呈正相关，与多种免疫细胞浸润正相关，且与免疫检查点等免疫相关基因表达正相关，并且设计了C16orf54检测试剂盒。