番茄独脚金内酯合成关键基因CCD7、CCD8 RNA沉默载体的构建

摘要

根据已知的番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)CCD7和CCD8基因的序列设计特异性引物,采用RT-PCR克隆CCD7和CCD8基因片段,通过特定酶切将2个基因进行拼接,再将串联基因以反向重复的方式连入pUCCRNAi载体,并定向插入到p35植物表达载体上.结果表明,克隆获得了大小约为400 bp的CCD7和CCD8基因片段,基因片段拼接后获得800 bp左右的串联片段CCD7-8;将该基因片段插入pUCCRNAi载体后得到1 700 bp大小的含Intron的反向重复序列In-7-8,并成功插入到植物表达载体p35中,通过酶切分析,RNAi载体构建正确.最终成功构建了番茄CCD7和CCD82个串联基因的RNA沉默表达载体p35-In-7-8.