青天葵中独脚金内酯合成相关基因NfCCD7的克隆与表达载体的构建

目录

声明

摘要

引言

1研究背景

2本论文工作开展的整体思路

2．1研究依据

2．3研究内容与方法

2．4技术路线

第一章文献综述

1青天葵研究进展

1．1栽培和组织培养研究

1．2化学成分研究

1．3药理作用研究

1．4分子生物学研究

2独脚金内酯研究进展

2．1独脚金内酯的发现

2．2独脚金内酯的生物合成

2．3独脚金内酯的信号转导

2．4独脚金内酯的生物学作用

3展望

第二章青天葵独脚金内酯合成相关基因NfCCD7的克隆

1实验材料与试剂

1．1植物材料

1．2试剂

1．5仪器设备

1．6引物与测序

2实验方法

2．1青天葵转录组Unigenes的筛选

2．2青天葵叶片总RNA的提取

2．3总RNA的质量检测

2．4总RNA第一链cDNA的合成

2．5青天葵NfCCD7的扩增

2．6青天葵NfCCD7 cDNA全长的拼接

2．7青天葵NfCCD7编码区的扩增

2．8基因编码蛋白的分析

3结果与分析

3．1青天葵转录组Unigenes的筛选

3．2青天葵叶片总RNA提取

3．3青天葵NfCCD7 cDNA全长序列的获得

3．4 NfCCD7编码区扩增

3．5青天葵NfCCD7基因编码蛋白的分析

4讨论

第三章NfCCD7／EGFP融合基因在烟草原生质体中的瞬时表达

1实验材料与试剂

1．1植物材料

1．2试剂

1．5溶液配制

1．6仪器设备

2实验方法

2．1融合基因表达载体的构建

2．2烟草原生质体的提取

2．3 PEG介导融合基因瞬时表达

3结果与分析

3．1融合基因表达载体的构建

3．2融合基因的瞬时表达

4讨论

第四章农杆菌介导NfCCD7转化拟南芥的初步探索

1实验材料与试剂

1．1植物材料

1．2试剂

1．3菌种及载体

1．4培养基与抗生素

1．5溶液配制

1．6仪器设备

2实验方法

2．1表达载体pRI 101 AN-NfCCD7的构建

2．2冻融法转化农杆菌

2．3农杆菌浸染拟南芥

3结果与分析

3．1 NfCCD7目的片段的扩增

3．2载体的构建

3．3拟南芥转基因植株的筛选

4讨论

结语

1结论

1．1从转录组数据库中筛选获得了目的Unigenes片段

1．2克隆得到了NfCCD7 cDNA全长序列

1．3克隆所得基因编码的NfCCD7蛋白定位于细胞的叶绿体中

1．4获得了T1代转基因拟南芥苗和种子

2展望

2．1遗传转化研究

2．2 NfCCD7的时空表达

2．3 NfCCD7的蛋白功能研究

参考文献

附录

硕士期间发表的论文

致谢