精子介导转基因动物的制备

摘要

采用直接注射的方法,将脂质体包裹的含人乳铁蛋白基因的重组质粒pLNCXHLF注入兔睾丸组织和羊输精管中,一个月后分别与正常雌兔及正常的母羊交配.所产仔兔均为活体,经PCR和Southern检测,转基因仔兔阳性率平均为35%(11/31);羔羊经引物F1/R1系统PCR检测阳性率为33.3%(4/12),F2/R2系统PCR检测阳性率为25%(3/12).将流产羔羊组织解剖后提取舌、肺、肝脏、肌肉、皮肤、脑、生殖腺、脾脏、小肠、心脏、肾脏共11种组织的总DNA进行PCR检测,发现:F1/R1和F2/R2系统PCR检测出阳性信号存在于不同组织;F2/R2PCR系统检测阳性信号较F1/R1PCR系统少;而且各种组织的外源DNA存在的拷贝数不等,造成阳性信号的强弱程度不同.结果表明:1)脂质体包裹外源基因转染精子的方法,可将外源基因导入受精卵,并得到了较高的转基因阳性率;2)精子携带外源DNA的整合过程是随机的,在受精过程和胚胎早期分化过程中可能发生了片段丢失、不完全整合或游离于基因组存在而产生嵌合体.本文的研究结果证明了该方法是一种简捷有效的新途径,为进一步深入探讨精子介导转基因动物制备可行性奠定了基础,给精子载体法制备转基因哺乳动物研究提供了有价值的参考.