Rubisco活化酶基因反义表达载体的构建与水稻的遗传转化

摘要

利用pGEM-T easy 、pBluescript KS+获得了RCA基因两端可以引入与双元表达载体pCAMBIA1301多克隆位点相匹配的单酶切位点,将该片段连接到pCAMBIA1301载体,构建了RCA基因的反义植物表达载体pCAMR02.通过电激法将该载体导入根癌农杆菌EHA105菌株中,以根癌农杆菌介导的方法,将反义载体pCAMR02转化粳稻品种中花11,获得了抗潮霉素的再生植株,经过GUS组织化学检测和PCR鉴定结果表明,目的基因确已经整合到这些转基因水稻基因组中.表型测定显示,大部分反义水稻不能在大气CO2浓度条件下生长,存活下来转化株也是生长缓慢,植株瘦小,RCA和Rubisco含量发生了明显改变,这对研究水稻RCA与Rubisco的相互作用和调控关系具有重要意义.