常氏肝癌细胞cDNA文库的构建及ADAMs相关基因的免疫筛选与序列分析

摘要

抽提常氏肝癌细胞的总RNA,以oligo(dT)为引物,通过两次转换模板,采用LD-PCR合成全长cDNA,在cDNA两端引入SfiⅠ的酶切位点.以λTriplEX2为载体经过包装后构建了常氏肝癌细胞cDNA表达文库.以ADAMs通用抗体,用免疫筛选技术从常氏肝癌cDNA文库中筛选出22个阳性克隆,经测序分析和BLAST检索,证实其中一个为新基因,部分区域具有蛋白酶的功能,对该基因进行了GenBank登录,获注册号为AY078070.该基因的克隆为研究ADAMs相关基因的功能奠定了基础.