ZNF230/荧光蛋白融合基因表达载体的构建及其在Cos细胞中的表达与定位

摘要

为了用绿色荧光蛋白标记观察人类无精症相关基因ZNF230在Cos7细胞中的蛋白质表达及定位,用PCR方法扩增得到突变的人和小鼠mt-ZNF230和mt-znf230基因,使其3′端的终止密码TGA突变为TGG,并装入T-载体,双酶切后通过定向克隆将其与真核表达载体pEGFP-N1的绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因融合,构建了ZNF230-荧光蛋白融合基因表达载体.然后经真核表达质粒-脂质体介导,导入Cos7细胞系.荧光显微镜观察显示:在空白载体pEGFP-N1转染的Cos细胞中荧光布满整个细胞,而在转染阳性载体pEGFP-ZNF230和pEGFP-znf230的Cos细胞中荧光主要聚集在细胞核中.表明转染的Cos细胞系能高效表达人ZNF230和小鼠znf230蛋白,ZNF230基因表达的蛋白定位于细胞核内.