ZNF463/荧光蛋白融合基因表达载体的构建及其在Cos-7细胞中的表达与定位

摘要

目的观察人类无精症相关基因ZNF463在Cos-7细胞中的蛋白质表达及定位.方法用RT-PCR法从正常人睾丸组织中扩增得到人ZNF463基因的翻译区全长cDNA,并定向克隆到真核表达载体pEGFP-Cl质粒中,构建了ZNF463-GFP融合基因表达载体.然后以脂质体介导转入Cos-7细胞中,荧光显微镜下观察.结果在转染重组真核表达载体pEGFP-ZNF463的Cos-7细胞中,荧光主要集中在细胞核内,而在转染空白载体pEGFP-C1的细胞中,荧光布满整个细胞.结论表明转染的Cos-7细胞能高效表达人ZNF463蛋白,ZNF463基因表达的蛋白定位于细胞核内,与其所属家族成员作为转录因子发挥作用的特征相符.