应用PCR-酶切连接法合成全长sFat1基因

摘要

人工合成基因在生命科学研究中有着重要的意义,因此基因合成是一项常用技术.长片段基因的合成比较困难,常常因为合成中碱基序列的错配、突变等原因而导致失败.研究者们所熟知的几种现行的方法仍然难以解决该问题.本研究在作者自身的工作经验中建立了一种新的基因合成方法,即PCR-酶切连接法.应用该方法成功地将化学合成的27个寡聚核苷酸片段(每个片段长60～68 bp)拼接组装起来,获得了完整的总长为1 226 bp的基因sFat-1.整个过程仅采用3轮PCR(共7个反应)、2轮的酶切连接(3个反应),而且未曾出现任何偏离预期基因序列的差错.该方法步骤较少,技术简单,出错极少,是合成长基因序列很好的选择.