不同泌乳期奶山羊乳腺OPN基因表达及其对MCF-7细胞生长的影响

摘要

为了研究骨桥蛋白基因(OPN)在奶山(Capra hircus)乳腺组织不同泌乳期的变化规律及其功能,采用SYBR Green染料建立该基因的实时荧光定量PCR(QPCR)分析方法,以β-acan基因为内参,对该基因在乳腺组织泌乳28d、60d、100d、190d、270d和330 d的mRNA表达水平进行检测:同时将该基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pcDNA3.1.OPN,所获重组质粒经过酶切和测序鉴定后.转染MCF-7细胞,采用MTT(四唑盐,3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5.di.phenytetrazoliumromid)法检测OPN对MCF-7细胞的增殖差异,结果表明:OPN基因在泌乳初期(28 d)和泌乳后期(190 d)表达水平较高,干奶期最低,其表达水平总体呈现高.低.高.低的变化模式.MTT实验表明转染OPN基因的MCF.7细胞较未转染基因组细胞的生长具有显著差异(P<0.05),说明OPN的表达具有促进MCF-7细胞生长的作用.