人工microRNAs 对拟南芥At1g13770和At2g23470基因的特异沉默

摘要

DUF647 (Domain of unknown function 647) 蛋白家族是在真核生物中广泛存在的、高度保守的蛋白家族.拟南芥中该基因家族共有6 个成员,迄今为止拟南芥DUF647 家族中4 个成员的功能尚不清楚.文章以拟南芥内源MIR319a 前体为骨架,构建了敲减DUF647 家族中2 个基因At1g13770 和At2g23470 表达的人工microRNAs(Artifical microRNAs,amiRNAs).利用WMD(Web microRNA designer)平台设计分别靶向At1g13770和At2g23470 基因的amiRNAs 序列,通过重叠PCR 置换拟南芥MIR319a 前体序列.构建融合amiRNAs 前体的植物表达载体pCHF3-amiRNAs,在农杆菌介导下转化拟南芥.RT-PCR 分析表明,amiRNAs 能够显著抑制At1g13770 和At2g23470 基因的表达,获得了抑制效果明显的转基因株系.At2g23470-amiRNA 转基因植株At2g23470 转录水平的下调导致育性严重下降.文章为进一步研究这两个基因的功能奠定了良好的基础.