用PCR体外定点突变技术诱导霍乱毒素A亚基突变体的构建

摘要

目的：有效去除霍乱毒素Ａ亚基的毒性作用而保存其佐剂性能。方法；采用ＰＣＲ体外定点突变技术，设计两对引物，引入一个突变位点，通过重叠延伸法两次ＰＣＲ扩增，使ＣＴ－Ａ编码基因第６３位密码子由ＣＴＣ突变为ＴＴＴ，亦将扩增片断克隆入ＰＵＣ１９载体。结果：ＤＮＡ测序结果表明在预期位点已发生突变，用ＰＣＲ诱导成功ＣＴ－Ａ突变体。